细胞核蛋白/浆蛋白抽提试剂盒（Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit）
提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白与浆蛋白的方法。约
90 分钟就可以完成培养细胞的核蛋白与浆蛋白的分离。抽提得到的蛋白为非变性，
有活性，可以用于Western、EMSA、footprinting、报告基因检测以及酶活力测定等
后续操作。本试剂盒是通过细胞浆蛋白抽提试剂A 和B，在低渗透压条件下，使细
胞充分膨胀后破坏细胞膜，释放出浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。zui后通
过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到核蛋白。本试剂盒可以抽提50 个，数量为
2×106 个Hela 细胞（约40mg）的样品。可根据需要按比例放大，缩小提取规模。
Elisa试剂盒 11:21:57
v 注意事项：
1. 需自备PMSF， PMSF 一定要在抽提试剂加入到样品前2-3 分钟内加入，以免
3. 对于组织样品，本试剂盒仅适合于新鲜组织，对冻存过的组织抽提效果差。可
4. 使用本试剂盒抽提得到的细胞核蛋白与细胞浆蛋白都可以直接用博迈德生产的
BCA 蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。但不适合用Bradford 法测定蛋白浓度。
Elisa试剂盒 11:22:56
v 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
准备溶液：室温融解试剂盒中的三种试剂，溶解后立即放置在冰上，混匀。取适当
量的CER A 备用，在需要加入前数分钟内加入PMSF 至终浓度为1mM。取适当量
的NER 备用，在需要加入前数分钟内加入PMSF 至终浓度为1mM。如果目标蛋白
含丰富的半胱氨酸，可在CER A、NER 中加入DTT 至终浓度0.5mM。
1. 对于贴壁细胞：用PBS 洗一遍，用细胞刮子刮下细胞，或用EDTA 溶液处理细胞
使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打细胞（不用胰酶消化，因为可能降解蛋
白）。500×g 离心2-3 分钟，尽可能吸弃上清，留下细胞沉淀备用。尽量避免用
2. 对于悬浮细胞：用PBS 洗一遍，500xg 离心2-3 分钟，尽可能吸弃上清，留下细
1） 把组织尽可能切成非常细小的碎片。在PBS 里面匀浆制成细胞悬液，500xg 离心
2） 把组织称重后，把组织尽可能切成非常细小的碎片，按照每50 毫克组织加入500
微升的比例加入CER A，匀浆后把匀浆液转移到塑料离心管内，接步骤5。在步
骤7 按照每200 微升CER A 加11 微升比例加入CER B。
4. 每20 微升细胞沉淀加入200 微升添加了PMSF 的CER A。（对于2×106 个Hela 细
5. zui高速剧烈Vortex 15 秒，把细胞沉淀*悬浮并分散开。（如果细胞沉淀没有完
7. 加入CER B 11 微升。zui高速剧烈Vortex 5 秒，冰浴1 分钟。
8. zui高速剧烈Vortex 5 秒，4℃ 14,000-16,000g 离心5 分钟。
9. 立即吸取上清至一预冷的离心管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用，
也可以冻存。（千万不要触及沉淀，可以在沉淀上方保留极小体积的上清，以免触
10. 对于沉淀，*吸尽残余的上清，加入50 微升添加了PMSF 的NER。（不吸尽上
11. zui高速剧烈Vortex 15-30 秒，把细胞沉淀*悬浮并分散开。然后放回冰浴中，
每隔10 分钟再高速剧烈Vortex 15－30 秒，共40 分钟。
Cytoplasmic Extraction Reagent A（CER A） 4°C. 10ml
Cytoplasmic Extraction Reagent B（CER B） 4°C. 0.55ml
Nuclear Extraction Reagent （NER） 4°C. 2.5ml
12. 4℃ 14,000－16,000xg 离心10 分钟。
13. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用，
也可以-70℃冻存。
Elisa试剂盒 11:23:54
v 问题与解决方法
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