活体组织氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）

YIJI 活体组织氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

YIJI 活体组织氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂氯甲基二氯

二氢荧光素二乙酯，在组织氧化损伤条件下，产生荧光，来定量检测组织内活性氧族的生成和增加的

而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适宜于活体动物组织的分析。可

以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活

体检测，性能稳定。

技术背景

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、*（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基

（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷

氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）

次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等

细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。氯甲基二氯二

氢荧光素二乙酯（6-chloromethyl-2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, acetyl ester；CM－H2DCFDA）是

取代二氯二氢荧光素二乙酯（2´,7´-dichlorodihydrofluorescin diacetate；DCFH-DA）的升级产品，一种*

自由通过细胞膜，并在细胞内长期滞留而不易外漏的染色剂。一旦被*、羟自由基或氢氧基、过氧

化基、次氯酸等氧化，便产生荧光。据此测定组织细胞内活性氧族的浓度。

产品内容

YIJI 清理液（Reagent A）

YIJI 染色液（Reagent B）

YIJI 稀释液（Reagent C）

产品说明书

毫升

微升

毫升

1份

保存方式

保存 YIJI 染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里，有效保

证6月

用户自备

50 毫升锥形离心管：用于组织收集的容器

15 毫升锥形离心管：用于工作液配制和组织处理的容器

1.5 毫升离心管：用于工作液配制的容器

6 孔细胞培养板：用于组织染色的容器

培养箱或恒温水槽：用于染色孵育

荧光显微镜：用于观察荧光组织

荧光分光光度仪：用于组织荧光定量检测

实验步骤

方法一：新鲜组织薄片定性检测

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的 YIJI 染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，YIJI

稀释液（Reagent C）放进 37℃恒温水槽里预热。然后移出 xx 微升 YIJI 染色液（Reagent B）到新

的 15 毫升锥形离心管，加入 xx 毫升 YIJI 稀释液（Reagent C)，混匀后，将 YIJI 染色工作液

置入暗室里。然后进行下列操作。

1． 手术取出动物组织

2． 放进预冷的 50 毫升锥形离心管

3． 加入 xx 毫升 YIJI 清理液（Reagent A）浸泡 15 秒

4． 用镊子取出组织，用无菌绵纸吸干

5． 即刻用刀片切离组织为 1cm X 1cm 大小的片状组织

6． 用镊子将组织薄片放进 6 孔培养板的一个孔

7． 加 xx 毫升含有 YIJI 染色液（Reagent B）和 YIJI 稀释液（Reagent C）的 YIJI 染色

工作液

8． 放进 37℃培养箱孵育 20 分钟，避免光照（注意：如果组织薄片较厚，可以增加孵育时间至 60 分钟）

9． 小心抽去 YIJI 染色工作液

10．加入 xx 毫升 YIJI 清理液（Reagent A）

11．用镊子将组织薄片放在载玻片上

12．压片

13．即刻在荧光显微镜下观察（定性检测）：激发波长 490nm，散发波长 520nm――荧光增强，表明活性氧

族（ROS）含量高

方法二：组织匀浆定量检测

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的 YIJI 染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，YIJI

稀释液（Reagent C）放进 37℃恒温水槽里预热。然后移出 xx 微升 YIJI 染色液（Reagent B）到新

的 1.5 毫升离心管，加入 xx 微升YIJI 稀释液（Reagent C)，混匀后，将 YIJI 染色工作液置入

暗室里。然后进行下列操作。

1． 手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量 100 毫克

2． 放进预冷的 50 毫升锥形离心管

3． 加 xx 毫升的 YIJI 清理液（Reagent A）

4． 用镊子取出组织，用无菌绵纸吸干

5． 即刻用刀片切碎组织

6． 放进一个预冷的 15 毫升锥形离心管

7． 加入 xx 毫升预冷的 YIJI 稀释液（Reagent C）

8． 涡旋震荡 5 秒，充分混匀

9． 即刻放入预冷的 YIJI 匀浆器

10．在冰槽里用研磨棒匀化组织（注意：切莫过度匀化）

11．将所有组织匀浆物移入 15 毫升锥形离心管

12．置入冰槽里备用

13．移取 5 微升组织匀浆物进行蛋白定量检测：建议使用 YIJI Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒

（GMS30030.1）

14．移取 xx 微升组织匀浆物（样品：100 微克蛋白）或 xx 微升 YIJI 稀释液（Reagent C）（背景对

照）到 1 毫升比色杯里

15．加入 xx 微升升含有 YIJI 染色液（Reagent B）和 YIJI 稀释液（Reagent C）的 YIJI

染色工作液

16．上下倾倒混匀

17．放进 37℃恒温水槽孵育 20 分钟，避免光照

18．即刻放进荧光分光光度仪检测：激发波长 490nm，散发波长 520nm——（样品 RFU-对照 RFU）＝实

际 RFU：增加，表明活性氧族（ROS）含量高

注意事项

1． 本产品为 20 次（组织匀浆）或 8 次（组织薄片）操作，包括背景对照

2． 建议使用新鲜组织，手术切除后 1 小时内的样品

3． 操作时，须戴手套

4． 系统检测，背景对照只需 1 次

5． YIJI 染色工作液配制后 1 小时内使用为佳

6． 孵育时，须避免光照

7． 如果组织薄片较厚，可以增加孵育时间至 60 分钟

8． 组织匀浆时，切莫过度

9． 建议组织染色完成后，即刻进行荧光定量或定性分析

10．本公司提供阳性对照甲萘醌溶液，观察组织荧光增强现象

11．本公司提供系列活性氧检测试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定荧光清晰