YIJI 活体组织氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）

YIJI 活体组织氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

YIJI 活体组织氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂二氯荧光乙

酰乙酸盐，在组织氧化损伤条件下，产生荧光，来定量检测组织内活性氧族的生成和增加的而经典的

技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适宜于活体动物组织的分析。可以被用于

细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，

性能稳定。

技术背景

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基

（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷

氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）

次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等

细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。2',7'-二氯荧光

乙酰乙酸盐（2',7'-dichlorofluorescein diacetate，DCFH-DA）一种*自由通过细胞膜的染色剂。一旦被过

氧化氢、过氧化基、过氧亚硝基阴离子等氧化，便产生绿色荧光。据此测定组织细胞内活性氧族的浓度。

产品内容

YIJI 清理液（Reagent A）

YIJI 染色液（Reagent B）

YIJI 稀释液（Reagent C）

产品说明书

毫升

毫升

毫升

1份

保存方式

保存 YIJI 染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里，有效保

证 12 月

用户自备

50 毫升锥形离心管：用于组织收集的容器

15 毫升锥形离心管：用于工作液配制和组织处理的容器

1.5 毫升离心管：用于工作液配制的容器

6 孔细胞培养板：用于组织染色的容器

培养箱或恒温水槽：用于染色孵育

荧光显微镜：用于观察荧光组织

荧光分光光度仪：用于组织荧光定量检测

实验步骤

方法一：新鲜组织薄片定性检测

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的 YIJI 染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，YIJI

稀释液（Reagent C）放进 37℃恒温水槽里预热。然后移出 xx 微升 YIJI 染色液（Reagent B）到新

的 15 毫升锥形离心管，加入 xx 毫升 YIJI 稀释液（Reagent C)，混匀后，将 YIJI 染色工作液

置入暗室里。然后进行下列操作。

1． 手术取出动物组织

2． 放进预冷的 50 毫升锥形离心管

3． 加入 xx 毫升 YIJI 清理液（Reagent A）浸泡 15 秒

4． 用镊子取出组织，用无菌绵纸吸干

5． 即刻用刀片切离组织为 1cm X 1cm 大小的片状组织

6． 用镊子将组织薄片放进 6 孔培养板的一个孔

7． 加入 xx 毫升含有 YIJI 染色液（Reagent B）和 YIJI 稀释液（Reagent C）的 YIJI 染

色工作液

8． 放进 37℃培养箱孵育 20 分钟，避免光照（注意：如果组织薄片较厚，可以增加孵育时间至 60 分钟）

9． 小心抽去 YIJI 染色工作液

10．加入 xx 毫升 YIJI 清理液（Reagent A）

11．用镊子将组织薄片放在载玻片上

12．压片

13．即刻在荧光显微镜下观察（定性检测）：激发波长 490nm，散发波长 520nm――绿色荧光增强，表明活

性氧族（ROS）含量高

方法二：组织匀浆定量检测

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的 YIJI 染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，YIJI

稀释液（Reagent C）放进 37℃恒温水槽里预热。然后移出 xx 微升 YIJI 染色液（Reagent B）到新

的 1.5 毫升离心管，加入 xx 微升 YIJI 稀释液（Reagent C)，混匀后，将 YIJI 染色工作液置入

暗室里。然后进行下列操作。

1． 手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量

2． 移取 1 克组织，放进预冷的 50 毫升锥形离心管

3． 加入 xx 毫升的 YIJI 清理液（Reagent A）

4． 用镊子取出组织，用无菌绵纸吸干

5． 即刻用刀片切碎组织

6． 放进一个预冷的 15 毫升锥形离心管

7． 加入 xx 毫升预冷的 YIJI 稀释液（Reagent C）

8． 涡旋震荡 5 秒，充分混匀

9． 即刻放入预冷的 DOUNCE 匀浆器

10．在冰槽里用研磨棒匀化组织（注意：切莫过度匀化）

11．将所有组织匀浆物移入 15 毫升锥形离心管

12．置入冰槽里备用

13．移取 5 微升组织匀浆物进行蛋白定量检测：建议使用 YIJI Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒

（GMS30030.1）

14．移取 xx 微升组织匀浆物（样品）或 xx 微升 YIJI 稀释液（Reagent C）（背景对照）到 1 毫升石

英比色杯里

15．加入 xx 微升升含有 YIJI 染色液（Reagent B）和 YIJI 稀释液（Reagent C）的 YIJI

染色工作液

16．上下倾倒混匀

17．放进 37℃恒温水槽孵育 20 分钟，避免光照

18．即刻放进荧光分光光度仪检测：激发波长 490nm，散发波长 520nm——（样品 RFU-对照 RFU）＝实

际 RFU：增加，表明活性氧族（ROS）含量高

方法二：组织匀浆微量检测

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的 YIJI 染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，YIJI

稀释液（Reagent C）放进 37℃恒温水槽里预热。然后移出 xx 微升 YIJI 染色液（Reagent B）到新

的 1.5 毫升离心管，加入 xx 微升 YIJI 稀释液（Reagent C)，混匀后，将 YIJI 染色工作液置入

暗室里。然后进行下列操作。

1． 手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量

2． 移取 200 毫克组织，放进预冷的 15 毫升锥形离心管

3． 加入 xx 毫升的 YIJI 清理液（Reagent A）

4． 用镊子取出组织，用无菌绵纸吸干

5． 即刻用刀片切碎组织

6． 放进一个预冷的 15 毫升锥形离心管

7． 加入 xx 毫升预冷的 YIJI 稀释液（Reagent C）

8． 涡旋震荡 5 秒，充分混匀

9． 即刻放入预冷的 DOUNCE 匀浆器

10．在冰槽里用研磨棒匀化组织（注意：切莫过度匀化）

11．将所有组织匀浆物移入 15 毫升锥形离心管

12．置入冰槽里备用

13．移取 xx 微升组织匀浆物进行蛋白定量检测：建议使用 YIJI Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒

（GMS30030.1）

14．移取 xxx 微升组织匀浆物（样品）或 xx 微升 YIJI 稀释液（Reagent C）（背景对照）到 1 毫升石

英比色杯里

15．加入 xx 微升升含有 YIJI 染色液（Reagent B）和 YIJI 稀释液（Reagent C）的 YIJI

染色工作液

16．上下倾倒混匀

17．放进 37℃恒温水槽孵育 20 分钟，避免光照

18．即刻放进荧光酶标仪检测：激发波长 490nm，散发波长 520nm——（样品 RFU-对照 RFU）＝实际 RFU：

增加，表明活性氧族（ROS）含量高

注意事项

1． 本产品为 20 次（1 克组织）、100 次（200 毫克组织）、500 次（200 毫克组织，酶标板）或 40 次（组织薄片）操作

2． 建议使用新鲜组织，手术切除后 1 小时内的样品

3． 操作时，须戴手套

4． 孵育时，须避免光照

5． 如果组织薄片较厚，可以增加孵育时间至 60 分钟

6． 组织匀浆时，切莫过度

7． 建议组织染色完成后，即刻进行荧光定量或定性分析

8． 本公司提供阳性对照甲萘醌溶液，观察组织荧光增强现象

9． 本公司提供系列活性氧检测试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定荧光清晰