产品中心您的位置:网站首页 > 产品中心 > > 试剂盒 > Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒

Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒

更新时间:2024-05-26

访问量:368

厂商性质:经销商

生产地址:上海

简要描述:
规格:20T/50T/100T,价格:400/700/1200元
规格:20T/50T/100T,价格:400/700/1200元
规格:20T/50T/100T,价格:400/700/1200元
品牌其他品牌规格20T/50T/100T
供货周期现货主要用途科研,化工

规格:20T/50T/100T,价格:400/700/1200元,产品简介

       Annexin是一类广泛分布于真核细胞细胞浆内钙离子依赖的磷酯结合蛋白,参与细胞内的信号转导。Annexin V选择性结合磷酯酰***(phosphatidylserine,简称PS)。****主要分布在细胞膜内侧,即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期,不同类型的细胞都会把***酸外翻到细胞表面,即细胞膜外侧。***氨酸暴露到细胞表面后会促进凝血和炎症反应。而Annexin V和外翻到细胞表面的磷***酸结合后可以阻断***的促凝血和促炎症反应活性。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。用带有绿色荧光的荧光探针FITC标记的Annexin V,即Annexin V-FITC,就可以用流式细胞仪或荧光显微镜非常简单而直接地检测到磷酯***酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。       Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒(Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit)是用FITC标记的重组人Annexin V来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的磷***酸的一种细胞凋亡检测试剂盒。可以使用流式细胞仪、荧光显微镜或其它荧光检测设备进行检测。      本试剂盒还提供了碘化丙啶染色液,碘化丙啶可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞,呈现红色荧光。对于坏死细胞,由于细胞膜的完整性已经丧失,Annexin V-FITC可以进入到细胞浆内,与位于细胞膜内侧的磷酯***酸结合,从而也使坏死细胞呈现绿色荧光。因此将Annexin V与PI匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

试剂盒组份 20 assays  50 assays 100 assays

Annexin V-FITC 100μL 250μL 500μL 4℃避光

结合液 15 mL 40 mL 75 mL 4℃

碘化丙啶 (PI) 100μL 250μL 500μL 4℃避光

试剂盒以外自备仪器和试剂

流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、移液器、1.5m L离心管、载玻片、盖玻片、PBS、不含EDTA的****  

操作步骤

1、对于悬浮细胞:A、在进行完细胞凋亡刺激后,1000g (约1000-2000rpm) 离心5分钟,弃上清,收集细胞,用PBS轻轻重悬细胞并计数。(注意:PBS重悬不能省略,PBS重悬的过程同时也起到了洗涤细胞的作用,可以保证后续Annexin V-FITC的结合。)B、取1~5×105重悬的细胞,1000g离心5分钟,弃上清,注意要把PBS吸干净,(选做步骤:加入250ul的结合液轻轻重悬细胞,1000g离心5分钟,弃上清)加入500µl 结合液轻轻重悬细胞。        C、加入5µl Annexin V-FITC,轻轻混匀;再加入5 μL 碘化丙啶,轻轻混匀。        D、室温(20-25℃)避光孵育10分钟。可以使用铝箔进行避光。E、随即进行流式细胞仪检测,Annexin V-FITC为绿色荧光,PI为红色荧光。如果用于荧光显微镜下检测,滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞即可检测。2、对于贴壁细胞:A、把细胞培养液吸出至一合适离心管内,PBS洗涤贴壁细胞一次,用**细胞消化液(最好不用含有EDTA)消化细胞。(注:**消化时间不易过长,否则容易引起假阳性)B、细胞消化下来后,加入步骤2A中收集的细胞培养液,稍混匀,转移到离心管内,1000g离心5分钟,弃上清,收集细胞,用PBS轻轻重悬细胞并计数。。C、取1~5×105重悬的细胞,1000g离心5分钟,弃上清,注意要把PBS吸干净,(选做步骤:加入250ul的结合液轻轻重悬细胞,1000g离心5分钟,弃上清)加入500µl结合液轻轻重悬细胞。        D、加入5µl Annexin V-FITC,轻轻混匀;再加入5 μL 碘化丙啶,轻轻混匀。      E、室温(20-25℃)避光孵育10分钟。可以使用铝箔进行避光。F、随即进行流式细胞仪检测,Annexin V-FITC为绿色荧光,PI为红色荧光。如果用于荧光显微镜下检测,滴一滴上述染色后的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞即可检测。3、对于贴壁细胞的原位荧光显微镜检测:注:本方法的优点是可以原位观察细胞凋亡,缺点是部分凋亡由于不贴壁而检测不到。A、(选做)如果条件许可,把细胞培养于24孔板、48孔板或96孔板内;或将细胞于盖玻片上生长,用适当的凋亡诱导剂诱导细胞凋亡,并设立阴性对照组。B、吸除细胞培养液,加入PBS洗涤两次;或将盖玻片用PBS洗涤两次。(选做步骤:用250ul的结合液洗涤盖玻片一遍)        C、在500μL 的结合液中加入5μL Annexin V-FITC, 5 μL碘化丙啶,轻轻混匀。        D、将上述溶液滴加于培养板孔中,或滴加于盖玻片表面,使长有细胞的盖玻片表面均匀覆盖。        E、室温(20-25℃)避光孵育10分钟,随即在荧光显微镜下观察,Annexin V-FITC为绿色荧光,PI为红色荧光。

保存条件

4℃保存,Annexin V-FITC和碘化丙啶染色液需避光保存,一年有效。为长期保存,可以把Annexin V-FITC和碘化丙啶染色液适当分装后-20℃保存,结合液可以直接-20℃保存。

注意事项

1、如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。2、染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。同时荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。3、如果检测时Annexin V-FITC的荧光比较弱,建议用250ul的结合液轻轻重悬洗涤细胞,去除残余的磷酸盐溶液,同时也可缩小结合液的体积(比如200ul的体积)来提高Annexin V-FITC的工作浓度。4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。5、本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不适用于检测组织样本6、因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。7、用流式细胞仪检测,激发波长Ex=488 nm; 发射波长Em=530 nm。Annexin V-FITC的绿色荧光通过FITC通道(FL1)检测;PI红色荧光通过PI通道(FL2或FL3)检测,建议使用FL3。荧光补偿调节:使用未经凋亡诱导处理的正常细胞,作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。


留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7